Projekt: Redskaber til kontrol af virusinfektioner i danske svin II

Bevillingsgiver: Svineafgiftsfonden 1.1.2025-31.12.2025. 1.417.000. Kr. 

Fra 2022 har SEGES Innovation udvidet aktiviteterne vedr. reduktion af PRRSV med henblik på at opnå en større andel af PRRSV-fri besætninger, hvor KU bidrager med virologisk ekspertviden og avanceret laboratorieanalyser. Ansøgningen består derfor dels af arbejdspakker der udføres sammen med SEGES og dels af aktiviteter, der udføres af KU, men typisk i tæt samarbejde med de diagnostiske laboratorier Veterinært Laboratorum Kjellerup og SSI.

Arbejdspakke (AP) 1 er en fortsættelse af tidligere aktiviteter vedr. forbedret kontrol af virus infektioner specielt bland de yngre grise i farestalden og lige efter fravænning. I AP2 afsluttes de aktiviteter, der har fokuseret på at validere alternative prøvematerialer til påvisning af PRRS virus og antistoffer. I AP3 fortsætter overvågningen af PRRSV virus i Danmark kombineret med analyse af andre virus som PPV, mens AP4 er en afslutning af et projekt fokuseret på at undersøge effekten af PRRSV saneringer på forekomst af andre patogener. Fra 2026 fortsætter aktivitet 4 og dele af aktivitet 2 i regi af et projekt, der netop har fået finansieret af GUDP og som har deltagelse af bl.a. LFG.

Resultaterne af projekterne vil blive offentliggjort via udarbejdelse af danske og internationale rapporter/publikationer der vil blive formidlet til brugere via links på hjemmesiden og via dansk og engelsksproget publikationer. Rådata stilles gratis til rådighed ved henvendelse til projektleder.

AP 1: Kontrol af virus i danske grisebesætninger

Formål:
Effekten af vaccination af polte og søer mod IAV afhænger meget af ligheden mellem vaccinestammen og den stamme, der er i besætningen, og derfor ses der reduceret effekt af vaccination i nogle besætninger. Nylige internationale studier har vist at rækkefølgen og antal doser, hvorved en gris bliver vaccineret med forskellige influenza A virus-stammer har betydning for den efterfølgende beskyttelse af grisene. Derfor kan en bestemt kombination af de nuværende influenza A virus-vacciner være betydende for, hvor godt grisen er beskyttet efterfølgende. De to influenza A virus-vacciner (Respiporc FLU3 og Respiporc FLUpan) anvendes i en stor andel af de danske grisebesætninger, og de fleste polte bliver vaccineret i karantænestalden mod IAV inden indsættelse i besætningen. Resultaterne fra dette studie vil guide besætningerne til at vælge det mest optimale vaccinationsregime i forhold til at opnå en bred krydsbeskyttelse inden indsættelse af polte i besætningen.

Arbejdsplan:
Der indkøbes 30 influenza antistof negative grise ved fravænning (4 uger), og inddeles i fem grupper med 6 grise i hver, som opstaldes på Københavns Universitet. Grisene vaccineres tre gange med enten én eller begge vacciner i forskellig rækkefølge og med tre ugers mellemrum mellem vaccinationerne, som illustreret herunder:

* der er taget højde for at grisene skal akklimatiseres 1 uge efter ankomst inden første vaccination kan gives.
^Repiporc FLU3 og Respiporc FLUpan indgives i hver sin side af nakken på grisen. 

Der udtages blodprøver fra hver gris inden første vaccination og to uger efter hver vaccination. Blodprøverne udtaget inden første vaccination analyseres i en influenza A specifik antistof ELISA, mens serum efter 2. og 3. vaccination analyseres i hæmagglutinations inhibitionstest (HI-test) mod tre H1pdmNx virus og tre H1avNx virus, hvorved graden af beskyttelse mod forskellige stammer kan bestemmes. På baggrund af resultaterne fra HI-testen kan serumprøver med relativt samme titre pooles i en pool af tre til videre analyse i virus neutralisationstest (VNT) mod de samme seks influenza A virus. Resultaterne fra VNT vil give en indikation på om de forskellige kombinationer af vacciner, er i stand til at beskytte mod influenza, og om denne beskyttelse er specifik for vaccinestammen eller beskytter mere bredt mod afvigende stammer.

Tidsplan:
Den eksperimentelle del forventes gennemført i foråret 2025, laboratorieanalyserne afsluttes i august 2025, hvorefter data analyseres og offentliggøres i oktober-november måned.

Aktivitet 2: Optimal prøvemateriale for overvågning af PRRSV

Formål: 
I forbindelse med PRRSV-saneringsprogrammer er det en udfordring at vælge de rigtige prøvematerialer til påvisning af PRRSV, for eksempel i de faser af programmet hvor prævalensen af positive grise og søer er meget lav (1-5 %). I 2022-2024 er der foretaget validering af spytprøver, tunger samt haler/testikler (såkaldt processing fluid), og disse prøvematerialer anvendes nu hyppigt i besætninger under sanering. I takt med at regioner bliver fri for PRRSV, er der behov for et overvågningsprogram til tidlig påvisning af PRRSV, som både er billigt og følsomt. I forbindelse med Covid-19 anvendes spildevand nu som overvågningsmateriale for smittetrykket hos mennesker. Da PRRSV også udskilles via fæces og er påvist i gylle, vil prøver fra gylletanken kunne anvendes til en let og billig overvågning af PRRSV. Derudover antages det at re-infektion med PRRSV vil betyde en stigning i dødeligheden, og at de døde/aflivede grise vil indeholde store mængder PRRS virus. Formålet med denne aktivitet er at etablere og validere metoder til påvisning af PRRSV i gylle og i væske fra DAKA containere. 

Arbejdsplan:
I denne aktivitet vil vi i 2025 afslutte validering og optimering af laboratoriemetoder ved anvendelse af gylleprøver til påvisning af PRRSV, etablere og validere metode til påvisning af PRRS virus i væske fra DAKA-containere, samt bidrage til at overføre metoden til Veterinært Laboratorium Kjellerup, da prøver typisk vil blive analyseret på dette laboratorium. 

Samarbejdspartnere:
Indsamling af prøver vil blive foretaget af SEGES. KU vil foretage de laboratoriemæssige tests samt udveksle protokoller med Veterinært Laboratorium Kjellerup, og SSI da disse laboratorier også udfører tests for PRRS virus. 

Tidsplan: 
Valideringen er startet i 2024 og forventes afsluttet i løbet af første kvartal 2025.Resultaterne vil blive indarbejdet i anbefalinger til brugerne i løbet af 2-3 kvartal 2025. 

Aktivitet 3: Overvågning af nye virus og virus varianter i danske grise

Formål: 
Formålet er at sikre en løbende overvågning af nye virus, der potentielt kan udgøre en trussel for dansk griseproduktion, samt at overvåge den genetiske udvikling af de virus, der er i landet, samt at sikre optimale diagnostiske muligheder. Sekvensanalyse af PRRSV anvendes hyppigt i f.eks. USA og Spanien dels for at undersøge om vacciner kan forventes at være beskyttende, og dels som et led i smitteopsporing ved nye udbrud, da man ved sekventering kan se om det er det samme virus eller ny-introducerede virus, der forårsager re-infektioner. I forbindelse med reduktionsprogrammet for PRRSV vil der forekomme re-infektioner. Sekvensanalyse kan i disse tilfælde bidrage til at identificere, hvor virus kom fra. Dette kræver at der opbygges en database af danske PRRSV sekvenser. Hidtil er der kun anvendt en lille del af virus (ORF5), men i 2025 vil det blive undersøgt om sekventering af hele virus genomet (fuld genom sekventering) giver en større sikkerhed. 

Arbejdsplan:

PRRSV:
I samarbejde med Veterinært Laboratorium Kjellerup og SSI vil alle PRRSV positive prøver, hvor indsender giver tilsagn, blive delvist sekventeret (ORF 5) virus. Det tilstræbes at sekventere minimum 40 danske virus i 2025. Herudover vil der blive udvalgt 50 virus fra de seneste 5 år til fuld genom sekventering. 

Der er i 2023 etableret en online offentlig, anonymiseret version af de fylogenetiske træer til visualisering af diversiteten af PRRSV i Danmark – (https://prrsv.dk). Ligeledes kan indsender her finde besætningen virus, og sammenligne ligheden til de nuværende vaccinestammer. Hjemmesiden vil løbende blive udbygget og tilrettet i 2025. 

PPV
De senere år er der påvist nye genotyper af PPV, samtidig med at andelen af positive prøver er steget kraftigt. I samarbejde med Veterinært Laboratorium Kjellerup vil alle positive prøver fortsat blive genotypet. Genotypen kan have betydning for valg af vacciner. 

Samarbejdspartnere:
Praktiserende dyrlæger samt de diagnostiske laboratorier Veterinært Laboratorium Kjellerup, Kjellerup og SSI. 

Tidsplan: 
Virus bliver sekventeret i takt med at de bliver påvist på Veterinært Laboratorium Kjellerup, så aktiviteten strækker sig over hele året. 

AP 4: Effektive saneringsstrategier

Formål:
En af de motivationsfaktorer, der driver PRRSV reduktionsplanen, er forventning om øget sundhed, lavere dødelighed og forbedret produktivitet. Den markante effekt af en akut infektion med PRRSV er relativt vel-beskrevet, mens betydningen af PRRSV i kronisk inficerede besætninger ikke er undersøgt systematisk. Da PRRSV påvirker immunsystemet, vil infektion med PRRS virus øge modtageligheden for andre infektioner. Formålet med denne aktivitet er at undersøge forekomst af andre patogener før og efter PRRS saneringer og dermed få en indikation af effekten af øget smittebeskyttelse og udrydelse af PRRS, som co-infektion. 

Arbejdsplan:
I samarbejde med SEGES undersøges den generelle effekt af sanering på besætningens sundhedsprofil i 20 sohold, der alle gennemfører tiltag til reduktion af smittespredning (McREBEL). Sundhedsprofilen i alle besætningerne kortlægges før og efter sanering for PRRS med nanoscale PCR (Fluidigm). Desuden kort-lægges besætningernes nøgletal for produktivitet et år før sanering og op til 6 måneder efter sanering. Besætningerne vil være del af de besætninger, som deltager aktivt i de lokale saneringstiltag. Undersøgelsen er en fortsættelse fra 2024 og afsluttes i 2025. 

Samarbejdspartnere:
SEGES vil være ansvarlig for besætningsdelen og prøveindsamling, mens KU vil være ansvarlig for labo-ratorie analyserne.

Tidsplan:
Prøveindsamlingen forventes afsluttet i efteråret 2025, hvorefter resultaterne vil blive analyseret og formidlet ultimo 2025/primo 2026.